1.2022年考试复习题及参考答案

中国科学技术大学生命科学学院系
2021-2022 学年第 1 学期考试试卷
课程名称： 细胞生物学实验原理 课程代码：____ 院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 名词解释 问答题 合计
得 分 40 12 48 100 分
一、选择题（20 × 2）
1.细胞的无菌培养需要用到净化工作室的洁净级别为（）
A 100 B 1000 C 1 万 D 10 万
[参考答案]C;
净化工作间是基于无菌条件下进行细胞培养操作的场所，设计标准为万级，专供细胞培养、冻存以及细胞
治疗用。简称：万级细胞间，百级超净台
2.用于培养细胞的液体培养基，它的灭菌条件一般是用____μm 滤膜过滤？
A.0.45 μm B.0.5μm C.0.22μm D.0.3μm
[参考答案]C
细菌的大小普遍是大于或者等于 0.2um，但是实际上 0.2um 大小的细菌很少，0.22um 孔径的滤膜足以过滤
掉绝大部分细菌，甚至是环境中或者水样中的所有细菌。0.22um，除菌过滤，细菌被截留，并且很多细菌
由于受到压力而破，死亡。0.45um，降低微生物负荷，细菌大部分被截留，并且很多细菌嵌入滤膜。培养
基灭菌采用 0.22um 滤膜或高压蒸汽灭菌（营养成分会流失）。
3.下列哪一个描述正确的是？
A 台盼蓝可以染死细胞
B 可以用平衡盐溶液培养细胞
C.所用的培养基，均可以配置好一个月的用量放在 2~8℃冰箱中保存
[参考答案] A
死亡细胞胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡；
而普通的液体培养基，密封灭菌后放置在 2-8℃冰箱内可以保存三个月，普通的培养基平板可以保存一个月
或更久。但是如果培养基中含有易分解的物质，那么保留的时间就很短甚至需要现配现用。但一般培养基
保存于 4℃冰箱中，培养基内 CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂的颜色也
会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可
以通入无菌过滤的 CO2，以调整 pH 值。
4.设定培养细胞的二氧化碳培养箱的条件是____？
A.25℃，5% CO2 B.25℃，10% CO2 C.37℃，10% CO2 D.37℃，5% CO2
[参考答案] D
二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，培养箱要求稳
定的温度(37°C)、稳定的 CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH 值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%)，来对
细胞/组织进行体外培养的一种装置。
5.下列哪种溶液不能在含钙镁离子的环境中工作
A 胰酶 B 胶原酶 C 双抗溶液 D 谷氨酰氨溶液
[参考答案] A
钙离子和镁离子会影响胰酶的消化能力，导致胰酶消化能力下降，培养细胞时，消化的细胞数量有限，加
上细胞的密度依赖性，所以细胞培养时最好使用不含有钙镁离子的 PBS 缓冲液。
6. 实验室用的双抗溶液一般是指____？
A. 四环素-链霉素 B.嘌呤霉素-青霉素 C 青霉素-链霉素
[参考答案]C
青霉素-链霉素（Penicillin-Streptomycin Solution）混合液，通常也被称为“双抗”，是体外培养中为预防微
生物污染最常用的抗生素，常配制成 100 倍浓度母液使用。其中，青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，对
革兰阳性菌特别有效；而链霉素能够与细菌核糖体 30S 亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，对革兰氏阴
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性菌和革兰氏阳性菌均有效，但对革兰氏阴性菌特别有效。青霉素和链霉素联合使用可以预防绝大部分的
细菌污染，但青霉素溶液对温度和酸碱度较为敏感，室温易降解，需冷冻保存，PH 6.0～6.5 时最为稳定；
而链霉素则相对稳定，PH 5.0～7.5 时最为稳定
7.对于组织取材的原则不包含____？
A 严格无菌 B 要用锋利的器械切组织，尽量减少组织的损伤
C 尽量选取过分化的组织 D 注意快速新鲜，尽量在 4~6 小时之内完成
[参考答案]C
B 取材需要用锋利的器械，正确，C.取材选择新鲜和分化程度低的组织
8.对于用 CFSE 检测细胞的增殖实验，下列哪一个描述是正确的？
A SFEM 是一种可穿过细胞膜的荧光染料
B 其与细胞内分子的结合是可逆的
C 子代细胞中的荧光强度是亲代细胞的一倍
D 对于用流式检测 SFEM，可以选择 653nm 的激光做为它的激发光源
[参考答案]A
CFSE 荧光染料是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促
水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得 CFSE 成为一种良好的细胞标记物。当 CFSE 以含有两个乙酸
基团和一个 succinimidyl ester 功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进
入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的 CFSE 分子具有很高的
荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性（不可逆）；同时，其含有的 succinimidyl ester
基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。因此，当细胞进行分
裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减
弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在
488nm 的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细
胞分裂增殖的情况。
9.进行细胞冻融时，需遵从____原则？
A.慢冻快融 B.慢冻慢融 C.快动慢融 D.快动快融
[参考答案]A
慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加 DMSO 也是这个原理。 复苏细胞的原
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则是：快融。 主要是防止 DMSO 在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。
10.在培养细胞时，发现细胞培养液中有浑浊且 pH 值下降，请问是什么造成了其污染？
A 真菌 B 细菌 C 原虫 D 病毒
[参考答案]B
(1)细菌污染后培养基的 pH 值会突然降低，短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生；
有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液
中有大量圆球状颗粒漂浮。
(2) 真菌污染：真菌污染培养液清亮透明，丝状、管状或树枝状菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的
呈链状排列
(3) 支原体感染：细胞培养过程中, 支原体感染发生率高达 30%~60%,支原体是广泛存在于自然界中能独立
生活的最小微生物，直径 300-800 nm。更易透过 0.22-0.45 μm 滤膜。受支原体污染的细胞在培养时培养基
的 pH 值不会发生改变, 也不会浑浊，因此, 很难直接观察出细胞是否受到污染。
11.对于自噬的检测，下列说法正确的是
A 正常培养的细胞有较高的自噬活性，可以进行直接的自噬检测
B 可以用激光共聚焦显微镜直接观察自噬小体的形成
C 可以构建 GFP-LC3 质粒转染细胞，当自噬形成时，细胞中的 LC3 蛋白会向自噬小体迁移，我们可以
检测自噬小体中的荧光点数来判断是自噬的程度
D 可以用细胞中的 LC3 II/I 的比值表示自噬的强弱程度，LC3 II/I 值越小说明自噬越强
[参考答案]C
A. 正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，错误；
B. 自噬小体属于亚细胞结构，普通显微镜镜下看不到，直接在透射电镜下观察自噬不同阶段的形态变
化是一种非常直接的方法。
C.在荧光显微镜下采用 GFP-LC3 融合蛋白来示踪自噬形成：
由于电镜耗时长，不利于监测（Monitoring）自噬形成，人们利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象
开发出了此技术。无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3 融合蛋白转位至
自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以 通过计数来
评价自噬活性的高低。
D.自噬形成时，胞浆型 LC3（即 LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即 LC3-II），
因此，LC3-II/I 比值的大小可估计自噬水平的高低，值越大说明自噬越强。
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12.对于凋亡的检测，用 Annexin V/PI，流式结果显示 Annexin V+
/PI
-，请问这一结果预示着细胞处于凋亡的
哪个阶段____？
A.凋亡中期 B.凋亡晚期 C.活细胞 D.凋亡早期
[参考答案]D
解析：AnnexinV 是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝
氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 AnnexinV 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶
（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细
胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用，就可以将处于
不同凋亡时期的细胞区分开来。因此，将 Annexin V 与 PI 联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）
和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被 FITC 和 PI 结合染色呈现双
阳性（Annexin V+/PI+）。
13.显微镜的分辨率取决于____？
A 物镜 B 目镜 C.棱镜
[参考答案]A
显微镜的分辨率是由物镜决定的，分辨率与波长和物镜数值孔径有关系。
14.10x 单细胞测序，下列哪一个不是用于控制一个 beads 和一个细胞结合的
A 液流缓慢 B beads 数量远大于细胞数
C 后期通过 QC 去除 D 让一个 beads 和一个细胞落在一个 96 孔板中
[参考答案]D
10x 单细胞测序的制样要点：第一是控制 cell 和 beads 的流速，第二是 beads 的数目远远超过 cell 的数目，
即绝大多数的 beads 都是空的，只有少数的才捕获到了 cell。但是还是有个别的 droplet 里面会两个或者更多
的细胞，通过 QC 进行去除。
15.10x 单细胞测序的 GEM 不包括____？
A 逆转录酶 B 细胞 C 凝胶珠 D 转座酶
[参考答案]D
10×制样采用的 Gel bead in emulsion(GEM)，凝胶珠、细胞、逆转录酶（反转 mRNA）是囊括在内的
16.逆转录病毒的有关叙述错误的是____？
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A 逆转录病毒可致癌
B 逆转录病毒可以转染非分裂的细胞
C 逆转录病毒感染效率高，且细胞不容易死亡
D 逆转录病毒的转染效率高，被感染的细胞可以持续多代繁殖
[参考答案]B
逆转录病毒的特点 ：①就目前所知,在大多数情况下,逆转录病毒的肿瘤基因（oncogene,ONC）都能够在细
胞中转录. ②逆转录病毒的寄主范围相当广泛,包括无脊椎动物,其中有的还能够在人体细胞中生长；③逆转
录病毒不但感染效率高,而且通常不会导致寄主细胞的死亡,被它感染的或转化的动物细胞能够持续许多世
代,保持正常生长和保持病毒感染性的能力，但逆转录病毒的缺点是只能感染能够分裂的细胞，同时整合的
时候会导致宿主基因组突变，有潜在的致瘤性。
17.分别取两个品种的小鼠对它进行照射，检测小鼠尿液中的白蛋白含量（+++，++，+），若要比较小鼠的
差异情况应选择哪种分析方法？
A. T 检验 B f 分析 C 卡方分析 D 非参数检验
[参考答案]A
A. 如果是同一组患者治疗前后某项指标的变化是否存在显著差异，通常可以采用配对样本 T 检验的方式进
行考察。配对 T 检验与独立 T 检验其中比较容易混淆的是独立样本 t 检验和配对样本 t 检验。两者的主要
区别在于：配对样本 t 检验需要两组样本数相等，且要求每对配对数据之间要有一定的对应关系，而独立
样本 t 检验两组数据的样本个数可以不等。
B. F 分析：用于两个及两个以上样本均数差别的显著性检验。 由于各种因素的影响，研究所得的数据呈现
波动状
C. 卡方检验是一种用途很广的计数资料的假设检验方法。它属于非参数检验的范畴，主要是比较两个及两
个以上样本率( 构成比）以及两个分类变量的关联性分析。其根本思想就是在于比较理论频数和实际频数
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的吻合程度或拟合优度问题。
18.对于 CRISPER-Cas9 技术的优势描述，下列错误的是
A 只需要 sgRNA，就可以对目的 DNA 进行特异修饰
B sgRNA 比较小，容易合成
C 特异性
D sgRNA 短，载量低，避免了载量高带的并发症
[参考答案]A
CRISPER-Cas9 要对目的 DNA 进行特异修饰，需要同时提供 oligo 修复模板
19.研究蛋白互作的技术不包括____？
A.SPR B.qPCR C.Co-IP D. FRET. [参考答案]B
A. SPR 表面等离子共振（SPR）是一种光学现象，可被用来实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用。
C. Co-IP 免疫共沉淀，经典的蛋白互作研究技术
D. 荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)是较早发展起来的一门技术，随
着绿色荧光蛋白应用技术的发展，FRET 已经成为检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有
力工具，在生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等方面有着广泛的应用。
20.首先提出假设（由于未经检验是否成立，所以称为无效假设），用适当的统计方法确定假设成立的
可能性大小，如果可能性小，则认为假设不成立，拒绝它；如果可能性大，还不能认为它不成立，这
是（ A ）的过程；
A.反证法思想 B.小概率思想 C.假设检验 D.大概率思想
[参考答案]A
假设检验的原理：假设检验的基本思想是反证法和小概率思想。
反证法思想：首先提出假设，用适当的统计方法确定假设成立的可能性大小，如果可能性小，则认为
假设不成立，拒绝它。
小概率原理：是指小概率事件在一次随机试验中基本不会发生；概率小于多少算小概率是相对的，在
进行统计分析时要事先规定，即检验水准。
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二、名词解释（3 分/题）
1.一代生存期
培养细胞的“一代生存期”，是从细胞接种后到再次传代培养之前的这一段时间。细胞传一代后，一
般历经 3 个阶段潜伏期、指数生长期、衰退期。
2.sgRNA
sgRNA 在 CRISPR-Cas9 基因编辑系统中具有准确识别靶基因序列的作用。也称向导 RNA（guide RNA，
gRNA），作用于动质体（kinetoplastid）体内一种称为 RNA 编辑（RNA editing）的后转录修饰过程中。也是一
种小型非编码 RNA。可与 pre-mRNA 配对，其效果可影响编辑的效率、是否发生脱靶。
3.瞬时转染
瞬时转染（transient transfection）是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组 DNA 导入
感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体，可在比稳定
转染较短时间内收获转染的细胞。
4.组织工程
组织工程是应用细胞生物学和工程学原理,将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架
上进行人工培养繁殖、扩增,然后移植到人体内所需要的部位,从而达到器官修复或再造的治疗目的的一种技
术。三、简答题（48 分）
1.简述光学显微镜和电子显微镜的区别
区别：
1．光学显微镜使用可见光作为光源，而电子显微镜利用高能短波长电子束代替可见光。
2．光镜的聚焦镜使用光学学镜片，电镜则使用电磁透镜。
3．成像系统不同。光学显微镜是利用振幅衬度，而电子显微镜是利用相位衬度，借助 CCD 成像
4．放大倍数不同，光镜一般最大能放大到 2000x，电镜则可高达数十万倍。
5．光镜仅能观察到表面微细结构，电镜可获取晶体结构、微细组织、化学组成、电子分布情况等。
或：
电镜 光学显微镜
光源 电子束 可见光
光镜聚焦镜 电磁透镜 光学棱镜
成像系统 荧光屏、底片、CCD 凸透镜放大
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成像机制 相位衬度 振幅衬度
分辨率 nm，亚显微结构 um，显微结构
样品要求 真空成像，厚度 50 -80 nm 左右 切片厚度 3- 5 um
2.流式细胞术四种对照和作用
1.空白对照 (negative control) 自发荧光/本底荧光对照 未染色的细胞 空白对照：不进行任何标记的细胞，
主要目的是用于测定基础荧光信号表达值。
2.同型对照：使用同种型抗体做平行实验，主要目的是消除抗体与样本的非特异性结合而产生的背景。
3.荧光补偿对照：当多种荧光被单波长激发时，荧光发射光谱会产生重叠，为纠正荧光光谱重叠-细胞样本
分别用单独的荧光抗体染色，来决定荧光重叠的水平，确定适合补偿
4.阳性对照：一般会使用已知的高表达目标抗原的细胞做平行实验，主要目的是排除实验中实验方法、试剂、
操作等实验的影响因素。
3.统计学分析方法选择注意因素
1、看资料中的反应变量是单变量、双变量、多变量。
2、看属于这三种资料里的哪一种，计量资料、计数资料、等级资料
拿到数据开始分析之前，一定要进行数据类型的划分
3、看是单因素还是多因素
4、看是单样本、两样本、还是多样本
5、看是否是配对或者配伍设计
6、看是否满足检验方法所需要的前提条件
4.蛋白 X 与 IFN-β抗病毒信号转导通路有重要作用，蛋白 X 与 IFN-β结合后被泛素化，设计实验方案确
定蛋白 X 是否被泛素化 泛素化的位点和介导的 E3 泛素连接酶类型
（1）目的蛋白是否被泛素化？
①WB 检测：目的蛋白降解与蛋白酶体有关
②正反向 IP 实验：WB 检测泛素 IP 下来的蛋白中是否有目的蛋白
③蛋白酶体抑制剂能够抑制目的蛋白的降解
（2）目的蛋白被哪个 E3 所催化泛素化，确定泛素化的类型
确认泛素连接酶，并当使用突变的泛素时，不能使目的蛋白泛素化
（3） 确定目的蛋白泛素化的位点

1. 质谱鉴定
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2. 突变确定可能的区域突变其中的 lysine 回补实验
   5.蛋白 A 在跨膜蛋白，有胞外区、胞内区、跨膜区，确定蛋白 A 在小鼠各脏器表达的转录水平和蛋白水平，
   并设计实验证明 A 基因过表达敲除或降低表达水平对细胞增殖活、细胞凋亡的影响（简述实验设计和方案）
   实验设计：
   1、qPCR 引物检测蛋白 A 在各组织的表达、WB 检测各组织的蛋白表达水平
   2、采用 shRNA 敲低或 CRISPR-CAS9 敲除、过表达载体进行过表达，采用 WB 进行验证敲除或过表达效率
   3、在第 2 步成功基础上，根据其可能的功能，检测敲除或过表达后细胞增殖和凋亡
   （1）细胞增殖 ：
   MTT 检测法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测法
   CCK 、Ki67 检测法进行，优先选择 Brdu,可以检测活体
   （2）细胞凋亡检测
   形态学检测：
   光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细
   胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
   其他检测方法
   1.染色细胞 ：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割
   2.Annexin V /PI:
3. DNA 片段化
4. TUNEL
5. 线粒体膜电位 ：而线粒体跨膜电位的下降 被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件
6. 细胞色素 c 释放
7. Caspase 活性
8. 凋亡相关蛋白检测

2.2021年考试复习题及参考答案

中国科学技术大学生命科学学院系
2020-2021 学年第 2 学期考试试卷
课程名称： 细胞生物学实验原理 课程代码：____ 院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 名词解释 问答题 合计
得 分
二、选择题（12 × 3）
1.洁净实验室主要是通过人为的手段，应用洁净技术实现控制室内空气中尘埃、含菌浓度、温
湿度与压力、以达到所要求的洁净度、温湿度和气流速度等环境参数。洁净度是指每升空气中
所含粒径≥0.5um 的尘粒的总颗粒，实验细胞间常用的超净工作台洁净度等级为（A）
A.100 级
B.1000 级
C.10000 级
D.100000 级。
2.HELA 细胞系在正常情况下为（ A ）
A.贴壁生长 B.悬浮生长 C.半悬浮生长
3.以下（ B ）采用结构光照明的方法，可用于微管蛋白动态的分析。
A.STED B.SIM C.STROM D.MINFLUX
4.洁净度级别为 10000 级,浮游菌的最大允许数为 100 每立方米,沉降菌的最大允许数为每皿
（ B ）
A.1 每皿 B.3 每皿 C.10 每皿 D.15 每皿
5.细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、经费，
（
装
订
线
内
不
要
答
题
）
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减少污染，减少细胞生物学特性变化，常用的细胞冻存液的配方比例为（ A ）。
A.10%DMSO+20%血清+细胞培养基 B.5%DMSO+10%血清+细胞培养基
C.10%DMSO+细胞培养基 D.10%血清+细胞培养基
6.RNA 干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA
（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。下面关
于 siRNA 说法错误的是（ C ）
A.siRNA 表达载体的优点在于可以进行较长期研究
B.以 DNA Oligo 为模版，通过体外转录合成 siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而
且能够比化学合成法更快的得到 siRNAs。
C.载体介导的细胞内表达 siRNA 一般不可建立稳定表达的细胞系。
D.siRNA 表达框架是一种由 PCR 得到的 siRNA 表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无
需事前克隆到载体中。
7.下面关于细胞实验常用的胶头滴管说法错误的是（ B ）
A.使用时胶头在上，管口朝下，防止液体进入胶头使得胶头腐蚀
B.滴管管口在滴加时伸入受滴容器，缓慢加入
C.滴瓶上的滴管必须与滴瓶配套使用
D.胶头滴管的清洗可以采用浓盐酸或重铬酸钾+浓硫酸
8.首先提出假设（由于未经检验是否成立，所以称为无效假设），用适当的统计方法确定假设
成立的可能性大小，如果可能性小，则认为假设不成立，拒绝它；如果可能性大，还不能认为
它不成立，这是（ A ）的过程；
A.反证法思想 B.小概率思想 C.假设检验 D.大概率思想
9.（ B ）是目前较为肯定的核增殖标志物，只在增殖期表达(G1，S 和 G2/M 期)，Go 期
缺失。与细胞有丝分裂密切相关，预示将进入分裂期的细胞数目。它在细胞有丝分裂过程中维
持 DNA 结构的稳定性，在多种恶性肿瘤中过表达，其表达水平可用于评价细胞的增殖状态、
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肿瘤的生物学行为。
A.Edu B.Ki-67 C.PCNA D.CFSE
10.荧光染料（ A ）是一种很有价值的细胞标记示踪剂，不仅用于细胞增殖的体外实验,也
可用于追踪细胞在体内的分裂增殖以及迁移过程。
A.CFSE B.BrdU C.Edu D.MTT
11.在细胞的体外培养过程中，诱导细胞定向分化、维持、调控乃至优化这种分化，从
而形成具有和在体组织相似功能的组织或器官,其中以下不属于组织工程的 3 大要素的是
（ D ）。
A. 种子细胞 B.生长因子 C.细胞外基质 D.动物器官
12.CyTOF 质谱流式细胞仪采用（ C ）标记或识别细胞表面和内部的信号分子，然后利
用流式细胞仪原理分离单个细胞，再用感应耦合等离子质谱（ICP-MS）观察单个细胞的原子
质量谱，将原子质量谱的数据转换为细胞表面和内部信号分子数据，通过专业分析软件对获得
数据进行分析，从而实现对细胞表型和信号网络的精细观察。
A.卤素 B.蛋白 C.金属元素 D.探针
三、名词解释（12 ×2 ）
1.原代培养（primary culture）：也称初代培养。即从体内取出组织接种培养到第一次传
代阶段，一般持续 1 一 4 周。完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分
裂增殖与生长发育的能力。
2.培养细胞的“一代生存期”：所谓培养细胞的“一代生存期”，是从细胞接种后到再次传代
培养之前的这一段时间，分为：潜伏期、对数生长期和停滞期。
3.流式细胞术（FCM）：是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或颗
粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）进行快速多参数定性或
定量检测和分选的一种细胞分析技术.
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4.MTT 检测法：主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法。
其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的 MTT 分解成兰紫色的
水不溶性的甲瓒(Formazan)，并沉积在细胞中，死细胞无此功能。
5.同型对照：用与实验抗体相同种属来源、相同剂量的抗体作为对照，消除抗体非特异性
结合到组织细胞而产生的背景染色（Ig isotype control）。
6. 荧光共振能量转移（FRET）:指在两个不同的荧光基团中，如果一个荧光基团（供体
Donor）的发射光谱与另一个基团（受体 Acceptor）的吸收光谱有一定的重叠，当这两个荧
光基团间的距离合适时（一般小于 100Å），就可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象，
用于研究两个已知蛋白质之间是否存在互作。
7. 细胞信号转导：细胞通过位于胞膜或胞内的受体感受胞外信息分子的刺激，经复杂的细胞
内信号转导系统的转换来影响细胞的生物学功能，这一过程称为细胞信号转导。
8. 共焦显微术：激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope，LSCM)
是在荧光显微镜成像基础上配置激光光源和扫描装置，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦
装置，利用计算机进行图像处理，对观察样品进行断层扫描和成像，是一种高敏感度与高分辨
率的显微镜
9. 分辨率（ resolution）：标本上两点之间的最短距离，R= 0.61 λ / NA，其中λ为波
长（对于荧光显微镜，就是荧光探针的发射波长）；NA 为物镜的数值孔径。
10.组织工程：是应用细胞生物学和工程学原理,将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种
生物材料的支架上进行人工培养繁殖、扩增,然后移植到人体内所需要的部位,从而达到器官
修复或再造的治疗目的的一种技术。
11.成体干细胞 adult stem cells 又称为组织干细胞，是存在于成体组织的未分化细胞，具
有自我增殖更新能力和多向分化潜能
12.完全随机设计（completely random design)：是指不加任何条件限制，应用随机数字
表或随机排列表将观察对象随机地分配到试验组和对照组;
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三、简答题：（40）

1. 请给出转染的定义，并写出至少 3 种转染的方法及原理
   转染(transfection)：指将外源分子如 DNA，RNA 等导入真核细胞的技术
   （1）化学介导：1973 年 Graham 和 Eb 在磷酸钙的存在下通过病毒 DNA 转化哺乳动物，
   开启了基因在细胞中瞬时表达的大门。
   （2）电穿孔法：通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的
   外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与 RNA、蛋白类、染料及病毒颗粒等导入原核和
   真核细胞内。
   （3）慢病毒 Lentivirus 转染：慢病毒感染宿主细胞时，可以将携带的外源基因随机、稳定
   地整合入宿主细胞基因组中，实现目的基因稳定、长期的表达，非常适合于基因过表达稳定细
   胞株的建立
2. 如何采用一种染色方法就可以区分正常细胞、细胞凋亡（早期、中晚期）及细胞坏死？
   答：Annexin V/PI 染色
   （1）Annexin V 是一种 Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，而在凋亡细胞早期 凋亡细胞的细胞膜
   表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表
   面。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性。
   （2）碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋
   亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。
   因此将 Annexin-V 与 PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来：
   （3）活细胞不能被 Annexin V-FITC 或 PI 染色
   （4）早期凋亡细胞因磷脂酰丝氨酸的暴露及具有完整细胞膜，故 Annexin V-FITC 染色阳性
   及 PI 染色阴性
   （5）坏死或晚期凋亡的细胞呈 Annexin V-FITC 及 PI 染色双阳性。
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   3.蛋白质磷酸化是指由蛋白质激酶催化的把 ATP 的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基（丝
   氨酸、苏氨酸、酪氨酸）上的过程，是生物体内一种普通的调节方式，在细胞信号转导的过
   程中起重要作用，请问蛋白的磷酸化如何检测？
   （1）使用特异性抗磷酸化蛋白抗体（p-Thr、p-Ser 和 p-Tyr ）结合 Western blot
   免疫组化和免疫荧光进行检测
   （2）流式细胞术
   （3）质谱分析法，如采用高通量磷酸化修饰组学筛选激酶的底物蛋白
   （4）放射性核素 32P 同位素放射性标记法：用 32P 同位素放射性标记磷酸盐作为磷酸基团
   供体，经过磷酸化酶促反应，带有 32P 同位素放射性标记的磷酸基团则转移到相应的反应蛋
   白上，通过凝胶电泳分离，可以用放射自显影或磷光成像仪检测磷酸化蛋白质。
   （5）激酶活性测定：蛋白激酶与磷酸酶抑制剂的应用
3. 流式细胞术中的前向散射光(forward scatter, FSC)、侧向散射光（side scatter, SSC)
   的意义，为什么要进行设门法？
   （1）相对大小 前向散射光(forward scatter, FSC)：
   （2）相对颗粒度密度等内部结构属性 侧向散射光（side scatter, SSC)
   （3）FCM 设门法：用门选择某一或某 用门选择某 或某些特性（荧光特性或散射光特性）
   的细胞 对门内的细 细胞，对门内的细胞群体作进一步的分析 它是定性细 分析，它是定性细
   胞亚群的重要方法
   5.解释什么是干细胞的不对称分裂？按分化特征分，干细胞分为哪 3 类？各给出一个例子
   干细胞的不对称分裂：
   （1）干细胞一方面进行自我更新（self renew)，产生与亲本完全相同的子代细胞，以保持
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   干细胞数量的恒定；
   （2）另一方面在一定条件下可以进入分化程序，通过不对称分裂产生分化的子代细胞，最终
   形成功能特异的组织类型，在组织修复和新陈代谢中起重要作用。
   按照分化特征分：
   （1）全能干细胞(Totipotent stem cell)具有形成完整个体的分化潜能，如受精卵
   （2）多能干细胞(pluripotent stem cell)具有分化出多种细胞组织的潜能，如造血干
   细胞、神经干细胞。
   （3）单能干细胞(multipotent stem cell)只能向一种或两种密切相关的细胞类型分化，
   如神经元干细胞只能分化成神经元。
4. 什么是假设检验的两类错误？增加样本量可能会对会对统计分析结果产生什么样的影响？
   （1）2 类错误是相对 假设检验时提出原假设和备择假设：
   第一类错误（Ⅰ类错误）也称为 α错误，是指当虚无假设(H0)正确时，而拒绝 H0 所犯的错
   误。这意味着研究者的结论并不正确，即观察到了实际上并不存在的处理效应 弃真
   第二类错误（Ⅱ类错误）也称为β错误，是指虚无假设错误时，反而接受虚无假设的情况，即
   没有观察到存在的处理效应。取伪
   （2）增大样本量的影响：
   1.增大样本量可以使两类错误降低：如果扩大了样本容量，那么抽样得到的值越接近于真实水
   平，那么如果原假设是成立的，这个抽样算出来的值（接近真实的值）很大程度上不会出现在
   拒绝域，因而减小了弃真误差。取伪误差同理。但在样本容量确定的情况下，α与β不能同时
   增加或减少。
   2.增加样本含量可以缩小变异系数，更接近真实情况，科学价值更高。

3.2020年之前考试复习题汇总

往届考试题汇总
题型：选择题（40×0.5），名词解释（5×3），问答题（7×5）
选择题考点回顾：
√1、K562 cell line（人类慢性髓原白血病）属于（悬浮细胞）
√2、常用的培养基是
√3、悬浮细胞常用的培养基是
√4、贴壁细胞常用的培养基是
√5、细胞生存全过程经历的阶段是
√6、细胞传代一次后经历的阶段是
7-10、给一张细胞图，问是什么类型的细胞，问是处于哪个生长时期的细胞，问是受了什么污染。
11、胎牛血清不必灭活。
√12、解冻血清：-20℃至 4℃至室温，切忌-20℃至 37℃。
13、HEPES 对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的 pH 范围。
14、合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷
氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨
酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置 1 周可分解 50%，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培
养液。加有谷氨酰胺的培养液在 4℃冰箱中储存 2 周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。
15、胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 Ca2+、Mg2+的 PBS 缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是 0.25％ 。
4℃保存一周，室温 30 分钟后不稳定。胰蛋白酶液消化时间：2-10 分钟。
16、台盼蓝法：活细胞不被染色，死细胞染成蓝色。
√17、消化细胞传代不能用：（不是酸性环境不能采用胃蛋白酶）
A、胰蛋白酶 B、EDTA C、胃蛋白酶 D、胶原酶
18、Annexin V /PI 双染法：
正常活细胞 Annexin V 、PI 均低染；
凋亡细胞 Annexin V 高染、PI 低染；
坏死细胞 Annexin V/PI 均高染
19、CFSE 染色：检测细胞增殖
20、TUNEL 染色：检测细胞凋亡
21、冻存和复苏的原则：慢冻快融
22、细胞冻存时对细胞影响最大是（形成大的冰晶）
23-24、利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）检测支原体污染。给了荧光图，判断是（支原体污染）。
支原体污染的一种常规检测方法是对细胞进行 DAPI 染色，在支原体污染的细胞中除了观察到正常的细胞核，细胞质也
有大量的絮状核酸物质被染成蓝色，这些处于细胞质的核酸物质就是支原体 DNA，说明细胞支原体污染非常严重。
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25、支原体污染后的抗生素处理：四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮
26、Hela 是（宫颈癌上皮细胞）
27、CTCs 属于什么类型的细胞
28、动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定 pH、温度、溶氧等），
在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。
29、初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。
30、已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。
31、从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，
称细胞株。
32、UNG 酶的作用原理是降解含有 dU 的双链或单链 DNA。
4*dNTP 加入比例：
dCTP， dGTP， dUTP， dATP＝1：1：2：1
dCTP， dGTP， dUTP， dTTP， dATP＝1：1：1：0.5：1
33、临床基因扩增检验实验室负压的区域是
34、我国把 BSL-3 和 BSL-4 实验室平面布局明确分为：“三区二缓”的结构。生物安全柜放在
35、进行大肠杆菌实验的实验室是几级实验室
名词解释：
1、万级净化与百级净化
2、正置显微镜与倒置显微镜
3、FSC与SSC
4、RNA干扰与siRNA：是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA
编码区同源的双链RNAs 时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，它发生在转录后水平，又称为
转录后基因沉默
5、生物气溶胶：气溶胶是指悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001-100μ m的固态或液态微小粒子形成的相
对稳定的分散体系。分散相含有生物因子的气溶胶
6、GFP：可溶性绿色荧光蛋白，最早是在一种学名Aequoreavictoria 的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，
在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。转染后的细胞可在活细胞工作站或流式细胞仪(FACS) 中
直接观察或检测基因的表达。
7、荧光漂白恢复技术:利用高能激光照射细胞的某一特定区域，使该区域内标记的荧光分子不可逆的淬灭。
随后，由于细胞质中的脂质分子或蛋白质分子的运动，周围非漂白区荧光分子不断向光漂白区迁移。结果
使荧光漂白区的荧光强度逐渐地回复到原有水平。
8、cell工作站技术：活细胞工作站技术是在活细胞状态下研究细胞分裂、迁移、衰老、以及凋亡的必要手
段，这种系统模拟活细胞的生存环境，可以维持活细胞长时间的正常生长繁殖、长时间连续追踪观察;能够
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4.复习重点（汇总）

5.排版好的PDF高清版 获取途径（资源2021年版，链接2022年最新版本）

（1）资源2021年版，同步更新，2022年版暂未获权

（2）如需 2022年最新版链接，在某宝和咸yu有链接，搜索 CSDN电饭煲 即可